J-STAGEによる日本語検索

キーワードとして、「唾液　心理ストレス　バイオマーカー」で検索したところ、31件の文献が得られました。タイトルを読んで自分の興味と照らし合わせていきます。

1. 卒業研究による長期的なストレスが生体内分泌に与える影響 野村 収作 日本感性工学会論文誌 2009年 8 巻 4 号 1075-1082 発行日: 2009/03/31　https://www.jstage.jst.go.jp/article/jjske2008/8/4/8_1075/_article/-char/ja　無料PDF

学会発表要旨が多くて、論文は数報しかありませんでした。総説はひっかからず、この検索はあまり効果的に思えません。

CINIIによる日本語論文検索

CINIIで「唾液　心理ストレス　バイオマーカー」で検索したところ、結果は0件でした。

PubMEDによる英語論文検索

saliva psychological stress biomarker　のキーワードで検索してみましたところ、757件ヒットしました。今度は多すぎて全部読むのは大変そうです。左側の際メニューでReviewのチェックボックスをオンにしたら54件に絞られました。いくつか関連性が少ないものを除外すればもっと減ります。30報弱ならひとつずつ要約をまず読んで、さらに吟味できる分量でしょう。これくらいの総説論文を読み込めば、総説論文がどのように書かれているものなのかのイメージもつかめると思います。

1. 1. Seizer L et al.,Timing matters: A meta-analysis on the dynamic effect of stress on salivary immunoglobulin Brain Behav Immun. 2024 Jul;119:734-740. doi: 10.1016/j.bbi.2024.04.039. Epub 2024 May 1. DOI:10.1016/j.bbi.2024.04.039　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0889159124003866?via%3Dihub　オープンアクセス
   2. Zarnegar R et al.,Nociception related biomolecules in the adult human saliva: A scoping review with additional quantitative focus on cortisol Mol Pain. 2024 Jan-Dec;20:17448069241237121. doi: 10.1177/17448069241237121. DOI:10.1177/17448069241237121　https://journals.sagepub.com/doi/full/10.1177/17448069241237121　オープンアクセス　痛みとストレスを刺激としたときのコルチゾール量の変化など
   3. Mohammadi et al., Recent advances in aptamer-based platforms for cortisol hormone monitoring Talanta . 2024 Jan 1;266(Pt 1):125010. doi: 10.1016/j.talanta.2023.125010. Epub 2023 Jul 31.  https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0039914023007610 本文無料
   4. Špiljak B et al.,A Review of Psychological Stress among Students and Its Assessment Using Salivary Biomarkers Behav Sci (Basel). 2022 Oct 18;12(10):400. doi: 10.3390/bs12100400. DOI:10.3390/bs12100400　https://www.mdpi.com/2076-328X/12/10/400　オープンアクセス
   5. Stoffel M et al.,How to assess and interpret everyday life salivary cortisol measures: A tutorial on practical and statistical considerations Psychoneuroendocrinology. 2021 Nov;133:105391. doi: 10.1016/j.psyneuen.2021.105391. Epub 2021 Aug 14. DOI:10.1016/j.psyneuen.2021.105391　https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/S0306-4530(21)00265-1　本文有料
   6. Chojnowska S et al.,Salivary Biomarkers of Stress, Anxiety and Depression J Clin Med. 2021 Feb 1;10(3):517. doi: 10.3390/jcm10030517. DOI:10.3390/jcm10030517　読みやすい総説論文　✅
   7. Giacomello G et al.,Current methods for stress marker detection in saliva J Pharm Biomed Anal. 2020 Nov 30;191:113604. doi: 10.1016/j.jpba.2020.113604. Epub 2020 Sep 6. DOI:10.1016/j.jpba.2020.113604　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0731708520314904　本文無料
   8. Peña-Bautista C et al.,Non-invasive monitoring of stress biomarkers in the newborn period Semin Fetal Neonatal Med. 2019 Aug;24(4):101002. doi: 10.1016/j.siny.2019.04.002. Epub 2019 Apr 4. DOI:10.1016/j.siny.2019.04.002
   9. Wiegand C et al.,MicroRNAs in Psychological Stress Reactions and Their Use as Stress-Associated Biomarkers, Especially in Human Saliva Biomed Hub. 2017 Oct 10;2(3):1-15. doi: 10.1159/000481126. eCollection 2017 Sep-Dec. DOI:10.1159/000481126　https://karger.com/bmh/article/2/3/1/49419/MicroRNAs-in-Psychological-Stress-Reactions-and　本文無料
   10. Strahler J et al.,Simultaneous measurement of salivary cortisol and alpha-amylase: Application and recommendations Neurosci Biobehav Rev. 2017 Dec;83:657-677. doi: 10.1016/j.neubiorev.2017.08.015. Epub 2017 Aug 31. DOI:10.1016/j.neubiorev.2017.08.015
   11. Condon EM et al.,Psychosocial Influences on Acceptability and Feasibility of Salivary Cortisol Collection From Community Samples of Children Res Nurs Health. 2016 Dec;39(6):449-462. doi: 10.1002/nur.21744. Epub 2016 Sep 30. DOI:10.1002/nur.21744
   12. Aguiló J et al.,Project ES3: attempting to quantify and measure the level of stress Rev Neurol. 2015 Nov 1;61(9):405-15. DOI:
   13. Kozlov AI et al.,[Cortisol as a marker of stress] Fiziol Cheloveka. 2014 Mar-Apr;40(2):123-36. DOI:
   14. Slavish DC et al.,Salivary markers of inflammation in response to acute stress Brain Behav Immun. 2015 Feb;44:253-69. doi: 10.1016/j.bbi.2014.08.008. Epub 2014 Sep 7. DOI:10.1016/j.bbi.2014.08.008
   15. Obayashi K et al.,Salivary mental stress proteins Clin Chim Acta. 2013 Oct 21;425:196-201. doi: 10.1016/j.cca.2013.07.028. Epub 2013 Aug 9. DOI:10.1016/j.cca.2013.07.028
   16. van Andel HW et al.,Salivary cortisol: a possible biomarker in evaluating stress and effects of interventions in young foster children? Eur Child Adolesc Psychiatry. 2014 Jan;23(1):3-12. doi: 10.1007/s00787-013-0439-1. Epub 2013 Jun 15. DOI:10.1007/s00787-013-0439-1
   17. Wakida S et al.,[Research on stress measurement biochip for a single drop of saliva] Nihon Yakurigaku Zasshi. 2013 Jun;141(6):296-301. doi: 10.1254/fpj.141.296. DOI:10.1254/fpj.141.296
   18. Inder WJ et al.,Measurement of salivary cortisol in 2012 – laboratory techniques and clinical indications Clin Endocrinol (Oxf). 2012 Nov;77(5):645-51. doi: 10.1111/j.1365-2265.2012.04508.x. DOI:10.1111/j.1365-2265.2012.04508.x　https://onlinelibrary.wiley.com/doi/10.1111/j.1365-2265.2012.04508.x　本文無料
   19. Marques AH et al.,Evaluation of stress systems by applying noninvasive methodologies: measurements of neuroimmune biomarkers in the sweat, heart rate variability and salivary cortisol Neuroimmunomodulation. 2010;17(3):205-8. doi: 10.1159/000258725. Epub 2010 Feb 4. DOI:10.1159/000258725
   20. Nater UM et al.,Salivary alpha-amylase as a non-invasive biomarker for the sympathetic nervous system: current state of research Psychoneuroendocrinology. 2009 May;34(4):486-96. doi: 10.1016/j.psyneuen.2009.01.014. Epub 2009 Feb 26. DOI:10.1016/j.psyneuen.2009.01.014
   21. Hellhammer DH et al.,Salivary cortisol as a biomarker in stress research Psychoneuroendocrinology. 2009 Feb;34(2):163-171. doi: 10.1016/j.psyneuen.2008.10.026. Epub 2008 Dec 18. DOI:10.1016/j.psyneuen.2008.10.026
   22. Soo-Quee Koh D et al.,The use of salivary biomarkers in occupational and environmental medicine Occup Environ Med. 2007 Mar;64(3):202-10. doi: 10.1136/oem.2006.026567. DOI:10.1136/oem.2006.026567
   23. Yamada S et al.,[Assessment of mental condition by saliva level of 3-methoxy-4-hydroxyphenylglycol] Seishin Shinkeigaku Zasshi. 2005;107(7):712-7. DOI:
   24. Weibel L et al.,[Methodological guidelines for the use of salivary cortisol as biological marker of stress] Presse Med. 2003 May 24;32(18):845-51. DOI:
   25. King SL et al.,Stress hormones: how do they measure up? Biol Res Nurs. 2002 Oct;4(2):92-103. doi: 10.1177/1099800402238334. DOI:10.1177/1099800402238334

論文の引用文献から辿る方法

総説や原著論文のイントロなどでは、原著論文を引用して様々な主張が展開されます。なので、読むべき論文を見つける方法として、論文の最後にある引用文献一覧が非常に役立ちます。

ヘッケルが唱えた発生反復説「個体発生は系統発生を繰り返す」という言葉は、トカゲとヒトの胎児がそっくりな図とともに、自分の心に食い込んできました。ヒトが発生する途中で一度トカゲになるわけでも、一度サルになってから人間になるわけでもないので、「個体発生は系統発生を繰り返す」という言葉は誤解を招きやすい表現です。種に特異的な構造は発生の後期に現れるという解釈が妥当なのだと思います。

しかし、カエルの発生を学んだあとで哺乳類の発生を学ぶと、最初から全然違うことに啞然としてしまいます。カエルの場合は、精子侵入点の逆側が将来の背側になります。受精卵の時点で、背側の構造が、一見、一様な球体のどこにできるかが決定されてしまっているわけです。それに対して、哺乳類では、卵割が進んで胚盤胞のなったときに外側の細胞層（栄養膜）と内部細胞塊にまず分化します。つまり、卵割期においては哺乳類ではどちら側が背中側になるかは決定していないわけです。そもそも栄養膜は胎盤をつくったりするので、卵割した割球の全てが個体の体になる両生類とは全然、最初からして違うわけです。

そのような初期の違いにもかかわらず、中胚葉誘導の分子メカニズムを勉強すると、同じようなシグナル分子が使われていることにまた驚かされます。最初の多様さが、一度収斂して、普遍性を垣間見ることができるわけです。そしてもちろん発生が進んで体のそれぞれの臓器が作られるときにはまた生物種固有の多様性が生じます。このように多様性ー普遍性ー多様性という形をとることから、「発生反復説」に代わって、「砂時計仮説」というものが提唱されています。

1. ミニマル発生学　岡敦子

動物極と植物極の定義

カエルの卵の場合、卵黄が多い半球（色素が少なく白く見える部分）と卵黄が少なめの半球（表面に色素がたくさんあって黒っぽい色をしている部分）とがあります。受精前は、カエル卵はランダムな方向を向いていますが、受精すると動物極（つまり黒い半球）が上を向くようになります。これは受精膜の中で卵という球体が自由に回転できるようになって、卵黄が詰まっていて重い植物極が重力によって下に向くからでしょう。

1. 重力とカエル卵の発生　宇宙生物学　　Vol.2, No.1, 16-24 （１９８８）総説　https://www.jstage.jst.go.jp/article/bss/2/1/2_1_16/_pdf/-char/en

受精卵は、極体があるほうを動物極、その反対側を植物極といいます。受精卵の段階で、動物極は頭になり、植物極は尾部や足になることが決まっているのです。https://www.try-it.jp/chapters-15244/sections-15245/lessons-15255/

上のトライの説明は少し意外でした。受精して極体を放出するまえの卵母細胞の段階でカエル卵などはすでに卵黄分布の非常に大きな偏りが存在していて、植物極と動物極はそれで決まっているからです。

1. https://ocw.u-tokyo.ac.jp/lecture_files/gf_02/1/notes/ja/asashima01.pdf

Wntシグナリングにはカノニカル経路と、非カノニカル経路とがあります。カノニカル経路は古くから研究が進んで明らかとなったほうの経路といった意味合いだと思います。具体的にはβ-カテニンが関与する経路の方です。それに対して非カノニカル経路の一つが、PCP経路です。PCPは、planer cell polarityの略で、平面上に並んだ上皮性の細胞の極性が揃うことを指します。

https://en.wikipedia.org/wiki/Planar_cell_polarity

PCP経路が阻害されると例えば細胞の線毛の向きが揃わないといった表現型が生じるようです。

https://www.tmd.ac.jp/mri/press/detail/id=58961

Wntシグナリング：カノニカル経路（β‐カテニンを経由する経路）

https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S2352304223000557

• APC（adenomatous polyposis coli）タンパク質は、2843アミノ酸残基からなる大きなタンパク質で、がん化や形態形成に重要な役割を果たします。WNTシグナル経路のシグナル伝達因子であるβ-カテニンに結合して、その分解を誘導することでWNTシグナル経路を抑制します。
• Behrens, J; von Kries, JP; Kühl, M; Bruhn, L; Wedlich, D; Grosschedl, R; Birchmeier, W (15 August 1996). “Functional interaction of beta-catenin with the transcription factor LEF-1.”. Nature 382 (6592): 638–42.　https://www.nature.com/articles/382638a0
  • Wntシグナル伝達機構がβ-カテニンタンパク質の細胞質存在量を調節し、その結果としてβ-カテニンが細胞核へ移行することのみが知られていた。しかしながら、β-カテニンにはDNA結合ドメインが存在せず、核内でどのようにWnt標的遺伝子を調節しているのかは不明であった。この発見を受けて、Wntシグナルによって調節されたβ-カテニンは細胞核でTCF/LEF型DNA結合タンパク質に結合し、TCF/LEFが’CTTTG’からなるコア周辺のコンセンサス配列（Wnt応答エレメント [Wnt response element, WRE]）を認識しているというモデルが確立された（ウィキペディア）

https://www.embopress.org/doi/full/10.15252/embj.201798873

1. T-cell factor (TCF) and lymphoid enhancer-binding factor (LEF) transcription factors share homology in their DNA binding domain with members of the High Mobility Group (HMG) box transcription factors family. (Search Labs | AI による概要)
2. Wnt3a–/–like phenotype and limb deficiency in Lef1(–/–)Tcf1(–/–) mice. Genes Dev. 13, 709-717. Galceran, J., Farinas, I., Depew, M. J., Clevers, H. and Grosschedl, R. (1999).
3. 2016年6月20日 発表 掲載誌Journal of Clinical Investigation（2016） doi:10.1172/JCI84658 細胞外分泌タンパク質Dickkopf1 (Dkk1)は、Wntシグナル阻害因子として報告されており古くは腫瘍抑制因子と考えられていました。一方で、Dkk1は膵がんや肺がん、食道がん、乳がん等において過剰発現しており、近年Dkk1にはがん細胞の増殖を促進する機能があると推測されていましたが、そのメカニズムは不明でした。　https://www.med.osaka-u.ac.jp/activities/results/2016year/article16

Planer cell polarity平面内細胞極性とは

　Cartoon representation of Planar Cell Polarity in fly wing hair cells and mouse paw hair cellsFigure 1. (A and B) Drosophila cuticular wing hair cells of the adult wing. Wing hairs point distally (to the right) in wild-type (WT) animals (A) but lose orientation in PCP mutants (fz) (B). (C and D) Hairs on the mouse paw point away from the body (pointing up) in WT (C) but grow in a swirling pattern in PCP mutants (fz6) (D). Inspired by the work of Paul Adler (A and B) and Guo et al. (2004) (C and D).　https://en.wikipedia.org/wiki/Planar_cell_polarity

ヒトを含む幅広い生物種は、発生過程で特定の組織において平面内細胞極性（Planar Cell Polarity; PCP）を獲得することが知られています。平面内細胞極性とは、平面上に並んだ多数の細胞が一定方向に沿って形成する細胞極性のことで、哺乳類の体毛や魚類の鱗が一定の方向に生えそろうためにはこの平面内細胞極性の形成が非常に重要です。https://www.nibb.ac.jp/press/2022/07/13.html

Biophysics in oviduct: Planar cell polarity, cilia, epithelial fold and tube morphogenesis, egg dynamics　February 2019　Biophysics and Physicobiology 16:89-107 DOI:10.2142/biophysico.16.0_89 LicenseCC BY-NC-SA　　https://www.researchgate.net/figure/Formation-of-planar-cell-polarity-A-D-Establishment-of-planar-cell-polarity-PCP-is_fig1_331338403

Planar cell polarity pathway in kidney development, function and disease　Nature Reviews Nephrology volume 17, pages369–385 (2021)

Published: 15 March 2017 Planar cell polarity in development and disease　Nature Reviews Molecular Cell Biology volume 18, pages375–388 (2017)　https://www.nature.com/articles/nrm.2017.11

Planer cell polarity平面内細胞極性が生じるメカニズム

組織に働く張力が平面内細胞極性の形成を制御していることがわかりました。

雑誌名 Development 掲載日　2022年6月16日　オンライン公開 論文タイトル： Alignment of the cell long axis by unidirectional tension acts cooperatively with Wnt signalling to establish planar cell polarity 著者：Sayuki Hirano, Yusuke Mii, Guillaume Charras, Tatsuo Michiue DOI： 10.1242/dev.200515

https://www.nibb.ac.jp/press/2022/07/13.html

細胞生物学の総説を読んでいると「カノニカル経路」という言葉をよく目にします。

Wntの細胞内情報伝達機構にはいくつかの種類があります。カノニカル経路といわれるのはβ-カテニン経路です。カノニカル canonical とは「正規の」の意味。どっちを正規と呼ぶかは主観の問題なので、研究の歴史において早くから明らかになった経路がカノニカルなのでしょう。

総説などで、カノニカル経路が何なのかの説明をみかけることはありません。どういう意味なのか、一応確認しておきます。ChatGPTが的確に説明してくれました。

In cell biology, the term “canonical pathway” refers to the standard, well-characterized, or classical version of a signal transduction pathway that is typically the most commonly studied and understood version. In the context of signal transduction, when we refer to the canonical Wnt pathway, for example, it typically means the Wnt/β-catenin signaling pathway, which is the main or classical route by which Wnt signaling regulates gene expression.

Key Features of a Canonical Pathway:

• Main or classical pathway: It is the primary signaling route through which a ligand (e.g., Wnt, Hedgehog, etc.) exerts its effects on the cell.
• Specific downstream components: In a canonical pathway, specific downstream molecules are activated in a well-established sequence (e.g., Wnt binds to its receptor, leading to the stabilization of β-catenin, which translocates to the nucleus to regulate gene expression).
• General or broad role: Canonical pathways often have broader and more general roles in regulating various cellular processes such as differentiation, proliferation, and development.

Examples:

1. Canonical Wnt pathway: Refers to the Wnt/β-catenin pathway, where Wnt signaling stabilizes β-catenin to activate gene transcription.
2. Canonical TGF-β pathway: Involves the activation of Smad2 and Smad3, which translocate to the nucleus and regulate gene expression.

In contrast, non-canonical pathways are alternative signaling routes that do not follow the classical mechanism and often involve different downstream components and processes, like the Wnt/PCP (planar cell polarity) pathway or Wnt/Ca2+ pathway.

Summary:

The term “canonical pathway” in signal transduction refers to the classical or standard version of a signaling pathway that involves well-defined molecules and mechanisms, widely studied and understood. (ChatGPTの解説）

左右差を生み出すものが線毛だったという1998年のセル論文は自分には大きな驚きでしたが、その発見は突然現れたものではなく、状況証拠がありました。左右が逆転する突然変異体の原因遺伝子が軸糸ダイニン（axonemal dynein）だったという論文が1997年にでています。

1. Mutation of an axonemal dynein affects left-right asymmetry in inversus viscerum mice D M Supp 1, D P Witte, S S Potter, M Brueckner　Nature 1997https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9353118/

Mechanism of Ciliary Movement || Structure of Cilia || How do Cilia Move? || Mucociliary Clearnace Nonstop Neuron チャンネル登録者数 13.9万人

How Do Cilia and Flagella Move? XVIVO Scientific Animation チャンネル登録者数 5.64万人

左右軸形成の分子機構の解明に関する全てはこの論文から始まったといえるでしょう。この論文を見たとき自分は、左右を決めるだけのことなのに、こんなややこしいことが本当に起きているのだろうかとかなり懐疑的な気分になりました。それから２０年以上が経過して、このメカニズムは揺るぎないものとなり生物学の教科書に当然のように紹介されています。

Randomization of Left–Right Asymmetry due to Loss of Nodal Cilia Generating Leftward Flow of Extraembryonic Fluid in Mice Lacking KIF3B Motor Protein Shigenori Nonaka ∙ Yosuke Tanaka ∙ Yasushi Okada ∙ Sen Takeda ∙ Akihiro Harada ∙ Yoshimitsu Kanai ∙ Mizuho Kido ∙ Nobutaka Hirokawa*　Cell Volume 95, Issue 6p829-837December 11, 1998　https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(00)81705-5

訂正 In this paper (Cell 95[6], 829–837), we described the direction of the nodal cilia rotation as counterclockwise (Figure 6B). However, our recent analyses with higher spatiotemporal resolution revealed that the actual direction is clockwise when seen from the ventral side (above the nodal pit cells). In our previous observation with lower temporal resolution (10 frames per second), the direction of the rapid rotation (∼10 rounds per second) of the nodal cilia was misinterpreted due to the artifact caused by the strobe effect. ‥　For further details, refer to our recent paper Y. Okada et al. (Molecular Cell, 1999, in press). https://www.cell.com/cell/fulltext/S0092-8674(00)80067-7

当初は繊毛の動きを反時計回りと報告したが、それはビデオの時間解像度が悪くて逆向きに動いたようにみえただけで、もっと高速で撮影したら時計まわりだったということです。

レビュー論文

1. Nodal Flow and the Generation of Left-Right Asymmetry Cell Volume 125, Issue 1, 7 April 2006, Pages 33-45 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S009286740600300X このレビュー論文では線毛が動く様子や蛍光ビーズが左側に流れていく様子などを示したわかりやすい動画も掲載されています。

左右軸形成に関する原著論文・総説論文

1. Molecular anatomy of emerging Xenopus left–right organizer at successive developmental stages Natalia Petri, Alexandra Vetrova, Nikoloz Tsikolia, Stanislav Kremnyov Developmental Dynamics First published: 27 June 2024 https://doi.org/10.1002/dvdy.722
2. R-Spondin 2 governs Xenopus left-right body axis formation by establishing an FGF signaling gradient　Nature Communications  Published: 02 February 2024
3. A dual function of FGF signaling in Xenopus left-right axis formation Isabelle Schneider, Jennifer Kreis, Axel Schweickert, Martin Blum, Philipp Vick Development 01 January 2019  https://journals.biologists.com/dev/article/doi/10.1242/dev.173575/264844/am/A-dual-function-of-FGF-signaling-in-Xenopus-left
4. Physical limits of flow sensing in the left-right organizer　Jun 14, 2017 https://doi.org/10.7554/eLife.25078　Two hypotheses have been proposed for asymmetric flow detection. According to the chemosensing hypothesis, the directional flow establishes a LR asymmetric chemical gradient that is detected by signaling systems which leads to LR asymmetric gene expression and cell responses in the LRO (Okada et al., 2005). The mechanosensing hypothesis, on the other hand, proposes that the LRO cells can detect the mechanical effects of flow. It has been suggested that this mechanosensing is mediated by a particular type of sensory cilia that is able to trigger a local, asymmetric response of the so-called crown cells, which are located at the periphery of the node (mouse LRO) (McGrath et al., 2003; Tabin and Vogan, 2003).
5. Cerberus–Nodal–Lefty–Pitx signaling cascade controls left–right asymmetry in amphioxus Save Related Papers Chat with paper Guang Li, Xian Liu, Chaofan Xing, +2, and Yiquan Wang PNAS March 20, 2017; 114 (14) 3684-3689 https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.1620519114
6. The Left-Right Coordinator: The Role of Vg1 in Organizing Left-Right Axis Formation Cell 3 April 1998; Volume 93, Issue 1, Pages 37-46
7. Developmental Biology Volume 189, Issue 1, 1 September 1997, Pages 68-78 Developmental Biology Regular Article Organizer Induction Determines Left–Right Asymmetry inXenopus

オーガナイザーという概念についてのそもそも論

Spemannは、原口背唇部をオーガナイザー（発生過程全体を組織化する、発生の主催者といった意味合いがある）と呼んだのですが、原口背唇部をオーガナイザーと呼ぶことには、当時から強い異論がありました。Spemann自身1938年の著作で「私は現象の目覚ましさを表現しただけで、オーガナイザー説を唱えているわけではない」[1]と述べ、Spemann門下の2巨匠であるJohannes HoltfreterとVictor Hamburgerが1955年までの両生類の胚操作の研究を網羅的にまとめた総説[2]では、彼らは「仮にオーガナイザーと呼ぶことにする」と注意深く記載しており、Holtfreterは「オーガナイザーは名前のつけ損ない(misnomer)」[3]と言い切り、Hamburgerも1988年の名著「実験発生学が遺したもの：ハンス・シュペーマンとオーガナイザー」[4] の中で、オーガナイザーという考え方は再検討すべきだということを慎重な表現の中で幾度も述べています。

それにもかかわらず、オーガナイザーの名前と仮想の機能は神格化され、どの教科書にも事実として記載され、世界中に広まりました。Spemannが「オーガナイザーの発見」によって、1935年にノーベル賞を受賞したことの副作用もあったのかもしれません。

発生生物学の静かな革命　VOL.1 実験発生学とオーガナイザー 近藤寿人（JT生命誌研究館 顧問・表現ディレクター）　JT生命誌研究館https://www.brh.co.jp/research/hisato_kondo/1/

オーガナイザーの定義

• 胚細胞の大掛かりな移動（原腸陥入）が起きている領域がある
• 別の胚（宿主胚）の他の場所に移植すると（例え不完全であったとしても）主に宿主胚の細胞から構成される２つ目の胚構造を生み出すという働きをする
• 2つ目の胚構造を構成する胚の部分としては、(1)頭部、(2)骨格や筋肉そのほかのもととしての中胚葉組織、(3)胴体の中心線に沿って伸びる、もう一つの中胚葉組織である脊索、(4)消化管のもとになる内胚葉組織など

発生生物学の静かな革命　VOL.1 実験発生学とオーガナイザー 近藤寿人（JT生命誌研究館 顧問・表現ディレクター）　JT生命誌研究館https://www.brh.co.jp/research/hisato_kondo/1/

ニワトリのオーガナイザーは原始結節か

• 『他の脊椎動物の胚の発生も「オーガナイザー」という中核的な組織の働きに依存して発生するはずである』
• 哺乳類と鳥類の胚ではノード（ヘンゼン結節とも呼ばれる）といわれる小領域、魚類胚では胚盾と呼ばれる不均一な組織集団が、実験に基づく根拠があやふやな状況で「オーガナイザー」であると決め付けられてしまった
• 次のような図がまことしやかに教科書に描かれるように

このような鳥類胚を用いたノード移植実験は、私たちが実行するまで行われたことはなかったし（実際には、胚の培養技術を改善して初めて可能になった難しい実験）、この図のような結果は決して得られることはないのです。

発生生物学の静かな革命　VOL.1 実験発生学とオーガナイザー 近藤寿人（JT生命誌研究館 顧問・表現ディレクター）　JT生命誌研究館　https://www.brh.co.jp/research/hisato_kondo/1/

1. On the nature and function of organizers Alfonso Martinez Arias ORCID logo , Ben Steventon ORCID logo Author and article information Development (2018) 145 (5): dev159525. 09 March 2018 　https://doi.org/10.1242/dev.159525

上のような解説がありましたが、ニワトリのオーガナイザーに関する総説論文

The avian organizer THOMAS BOETTGER1, HENDRIK KNOETGEN, LARS WITTLER and MICHAEL KESSEL*　Int. J. Dev. Biol. 45: 281-287 (2001)　https://ijdb.ehu.eus/article/pdf/11291858

を見ると、「古典的な実験」として、ニワトリ胚の2次軸形成が紹介されていました。そのデータの原著、出典は明記されていません。著者が自分の研究室で行った未発表データなのでしょうか、それとも何かほかの論文からでしょうか。他の論文でも、2次軸が部分的に形成された例ならありましたが、移植された結節とは別に、一次軸から2次軸が枝分かれしているようです（下のFig.8）なぜ移植片が周囲の組織を誘導するのでなく、遠く離れた一次軸から2次軸を枝分かれさせるのでしょうか。本文にどう書いているかというと

Inductive Effects of Grafted Hensen’s Node

Hensen’s node taken from stage 4 to stage 9 quail embryos (the majority was from stage 4) was transplanted to different sides of the axis of stage 4 to stage 6 chick embryos in the area pellucida. The graft differentiated into notochord, neural tissues, somites, and mesenchymal cells, and could also induce the associated host ectoderm to form neural tissue, as described previously (Gallera, 1971; Hornbruch et al., 1979). However, after examining the host embryos in detail, we found that a third axiswas formed in many host embryos besides the secondary axis formed by the grafted Hensen’s node itself (Fig. 8). The third axis was duplicated entirely from host tissue and usually contained a neural tube and somites (Fig. 9). As shown in Table 4, the stage 4 embryo was again the most sensitive to the inductive action of Hensen’s node. Like RA, Hensen’s node grafted on the left side or anterior side of the host axis could cause the duplication of the host axis most frequently (see Table 4). However, Hensen’s node produces more complicated inductive effects than RA. When Hensen’s node was grafted on the right side of the stage 4 host axis, it could also induce a third axis. Stage 5 embryos still responded to the inductive action of grafted Hensen’s node and yielded a third axis. Interestingly, if stage 5 embryos were used as the hosts, only those hosts that received a grafted Hensen’s node on the right side of their axis showed the duplication of the host axis. These results suggested that Hensen’s node might contain another inducing factor that acts like RA but in the opposite direction or might be more potent than the RA beads. However, if stage 6 embryos were used as hosts, grafted Hensen’s node failed to cause axial duplication in the hosts. When primitive streak taken from stage 4 to stage 6 quail embryos was transplanted to stage 4 chick blastoderms as a control experiment, none of the total 12 cases showed host axis duplication (Fig. 8).

 

DEVELOPMENTAL DYNAMICS 19514%151 (1992) Comparison of Hensen’s Node and Retinoic Acid in Secondary Axis Induction in the Early Chick Embryo YIPING CHEN AND MICHAEL SOLURSH

1. Gallera, J. (1971) Primary induction in birds. Adv. Morphog. 9:149-180 https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/B978012028609650008X
2. Hornbruch, A,, Summerbell, D., and Wolpert, L. (1979) Somite formation in the early chick embryo following grafts of Hensen’s node.　J. Embryol. Exp. Morphol. 51:51-62. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/479748/

他にも本文や図はみられませんがグーグル検索で引っかかった図として、下のものがありました。

https://ars.els-cdn.com/content/image/1-s2.0-S0070215324000255-gr2.jpg

かなりややこしい状況です。確かに、上の日本語の総説のような完全な2次軸が形成されるというデータは見当たらないかもしれません。

Consensus.aiで「ニワトリ胚でHensen’s nodeを異所性に移植すると、完全な体軸が誘導され、ホスト由来の神経組織を含む完全な胚軸が形成されるか？」と訊いてみると、100%YESの回答がきました。しかし根拠として挙げられてている論文を見ると、どうも全然根拠になっていないようです。生成AIは、適当に答えをでっちあげている可能性があります。生成AIはネット上の文書をインプットしているので、ネット上の文書が間違っていると、それらを統合した出力も当然間違っていることになります。

完全な体軸の誘導:Hensen’s nodeを異所性に移植すると、ホスト由来の神経組織を含む完全な体軸が形成されることが示されています12456789。

神経誘導の能力:Hensen’s nodeは、異所性に移植された場合に新しい神経軸を誘導する能力があり、特に若い段階のnodeが強い誘導能力を持つことが確認されています2357。

ホストとドナーの寄与:異所性に移植されたHensen’s nodeは、ホスト由来の神経組織を誘導し、ドナー由来の組織と融合することなく独立して発達することが観察されています469。

年齢の影響:Hensen’s nodeの年齢が神経誘導の結果に影響を与え、若いnodeは前部および後部の神経系を誘導し、年齢が進むと後部の神経系のみを誘導する傾向があります27。

分子メカニズム:Hensen’s nodeによる神経誘導には、特定の転写因子や分泌分子が関与しており、これらが胚全体に拡散して神経板の形成を誘導することが示唆されています358。

結論　Hensen’s nodeを異所性に移植すると、ホスト由来の神経組織を含む完全な体軸が形成されることが複数の研究で確認されています。この能力は、特に若い段階のnodeで顕著であり、神経誘導には特定の分子メ THOMAS BOETTGER1, HENDRIK KNOETGEN, LARS WITTLER  THOMAS BOETTGER1, HENDRIK KNOETGEN, LARS WITTLER R 

1. The avian organizer THOMAS BOETTGER1, HENDRIK KNOETGEN, LARS WITTLER and MICHAEL KESSEL*　Int. J. Dev. Biol. 45: 281-287 (2001)　https://ijdb.ehu.eus/article/pdf/11291858
2. Restoration of the organizer after radical ablation of Hensen’s node and the anterior primitive streak in the chick embryo Delphine Psychoyos, Claudio D. Stern Author and article information Development (1996) 122 (10): 3263–3273.　01 October 1996　https://doi.org/10.1242/dev.122.10.3263　https://journals.biologists.com/dev/article/122/10/3263/38976/Restoration-of-the-organizer-after-radical
3. Axis development in avian embryos: the ability of Hensen’s node to self-differentiate, as analyzed with heterochronic grafting experiments Takayuki Inagaki, Gary C. Schoenwolf  Anat Embryol (1993) 188:1-11 Type-3 experiments. Ten cases of ectopic embryos were obtained from the 13 host blastoderms. In such ectopic embryos, the transplanted nodes self-differentiated into notochord, somites, mesenchyme, and endoderm; the host’s ectoderm typically responded to the grafted cells by forming a neural tube, which often had a morphology characteristic of that of rostral brain levels (i.e., forebrain and midbrain (Figs. 10, 11). https://link.springer.com/article/10.1007/BF00191446 この写真をみても外観を見る限り、きれいな2次軸が形成されるというほどではないようです。組織切片をみて、それぞれの組織への分化が確認できたとのことのようです。
4. Formation of ectopic neurepithelium in chick blastoderms: Age-related capacities for induction and self-differentiation following transplantation of quail Hensen’s nodes Mark S. Dias, Dr. Gary C. Schoenwolf First published: December 1990 https://doi.org/10.1002/ar.1092280410　本文有料
5. Neural induction and regionalisation in the chick embryo. Yes 若いヘンゼン結節 (ステージ 2 ～ 4) は前部神経系と後部神経系の両方を誘導しますが、古い結節 (ステージ 5 ～ 6) は後部神経系のみを生成します。 Development Kg Storey et al. 261 Citations 1992
6. Multiple neural inductions in area opaca by grafts of the Hensen’s node do not retard host chick embryo development. Yes ヘンゼン結節の移植による不透明領域での複数の神経誘導は、宿主のニワトリ胚の発育を遅らせない。 Indian journal of experimental biology G. Guttikar et al. 3 Citations 1993
7. Neural induction and regionalisation by different subpopulations of cells in Hensen’s node. Unknown 神経誘導能はヘンゼン結節の内側部の胚盤葉上層と中内胚葉に局在しているが、後外側部の深部にはこの能はない。 Development Kate G. Storey et al. 56 Citations 1995

灰色新月環　gray crescent

http://digfir-published.macmillanusa.com/pol2e/asset/img_ch38/c38_fig01.html

アフリカツメガエルの原腸陥入

灰色新月環は下の動画だと良くわかりません。

Xenopus laevis; gastrulation through neurulation Oxford Academic (Oxford University Press) チャンネル登録者数 15.6万人

シュペーマンのオーガナイザーの定義

The organizer is a region of the gastrula embryo that can induce the formation of a second neural axis when transplanted to an undifferentiated region of a host gastrula stage embryo (1). https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC27625

　　原図（A～C) Hamburger, V. 1988. The Heritage of Experimental Embryology: Hans Spemann and the Organizer. Oxford University Press, Oxford. 図引用元：Scotte Gilbert Developmental Biology. 6th edition.　Axis Formation in Amphibians: The Phenomenon of the Organizer　https://www.ncbi.nlm.nih.gov/books/NBK10101/

シュペーマンのオーガナイザーの今昔に関しては、International Journal of Developmental Biologyの特集号が非常に有益だと思います。2001年の特集号なので、今となってはそこからさらに24年の歳月が経過してはいますが、2001年当時の理解がわかります。Scott Gilbertの総説は非常に読み応えがありました。さすが大著のベストセラーの教科書を書いているだけのことはあります。読ませます。

1. The International Journal of Developmental Biology Volume 45 > Issue 1 (Special Issue) Cover Vol. 45 N. 1 The Spemann-Mangold Organizer Edited by: Eddy DeRobertis and Juan Aréchaga　https://ijdb.ehu.eus/issue/45/1

シュペーマンのオーガナイザーとして同定されたシグナル分子は驚くほど多数あります。オーガナイザーとして積極的に働く分子があるというよりも、デフォルトでは尾部を形成するシグナルとしてBMPシグナルとWntシグナルがあり、それらに対する阻害因子が頭部を形成するという図式になっています。そのため、オーガナイザー分子は、BMPシグナリングの阻害因子とWntシグナリングの阻害因子とに大別されます。BMPはTGF-βスーパーファミリーに属しています。

シグナル分子がやまのように出てきてかなり混乱させられるのでまずは主要なシグナル伝達経路を復習しておきます。

TGF-βファミリー分子のシグナル経路：R-SmadとCo-Smad

ちなみにTGF-βスーパーファミリーは、3つのサブファミリーに分かれ、TGF-βファミリー、アクチビンファミリー、BMP(bone morphogenetic protein)ファミリーがあります。TGF-βスーパーファミリーは、Smadがエフェクターとなる共通するシグナル経路によって特徴づけられています。まず受容体ですが、細胞膜上に存在する「2型受容体」と「1型受容体」の2種類の受容体があります。TGF-βが結合した2型受容体は1型受容体と複合体を形成します。2型受容体はセリン・スレオニンキナーゼで、1型受容体をリン酸化します。1型受容体もセリン・スレオニンキナーゼ型受容体でリン酸化によりキナーゼ活性をもち、R-Smadをリン酸化します。R-Smadにはいくつかの種類があります。Smad2、Smad3は、TGF-βやアクチビンのシグナルを伝えるエフェクターです。Smad1、Smad5、Smad8は、BMPのシグナルを伝えるエフェクターです。リン酸化されたR-Smadは、Co-Smadと呼ばれるSmad4と結合して複合体をつくります。R-SmadとCo-Smadの複合体は、細胞質から核に移行し、標的遺伝子の転写調節領域に存在するSBE(Smad binding element)に結合することにより、ほかの転写因子などと協同して標的遺伝子の発現を制御します。ほかに、R-SmadやCo-Smadの働きを抑制するI-Smadとしては、Smad6とSmad7があります。

1. https://www.md.tsukuba.ac.jp/epatho/privacy.html

上の文章による説明にピッタリ合う模式図が、下の論文にありました。

https://www.researchgate.net/publication/7654580_Non-smad_TGF-beta_signals

Non-Smad TGF-β signals J Cell Sci (2005) 118 (16): 3573–3584. https://journals.biologists.com/jcs/article/118/16/3573/28415/Non-Smad-TGF-signals

1. Antagonism between Smad1 and Smad2 signaling determines the site of distal visceral endoderm formation in the mouse embryo　J Cell Biol. 2009 Jan 26;184(2):323–334. doi: 10.1083/jcb.200808044 https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC2654303/　

nodalシグナリング：カノニカル経路と非カノニカル経路

nodalはTGF-βファミリーに属するので、カノニカル経路としてはSmadの活性化があります。

　Schematic Overview of Nodal and Cripto-1 Signaling Pathways. A) Canonical Nodal signaling using Cripto-1 as a co-receptor. Nodal can also activate this pathway, albeit less efficiently, independently of Cripto-1. B) Cripto-1 Nodal-independent signaling via binding with Glypican-1 and activating src/Ras/raf/PI3K downstream signaling. C) Possible signaling of Cripto-1 through binding to beta-integrins and signaling via FAK-dependent signaling pathway.

2011 Sep 19. Published in final edited form as: Breast Dis. 2008;29:91–103. doi: 10.3233/bd-2008-29110 Emerging Roles of Nodal and Cripto-1: From Embryogenesis to Breast Cancer Progression　https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC3175751/#ref-list1

Wnt経路

Wntの細胞内情報伝達機構にはいくつかの種類があります。カノニカル経路といわれるのはβ-カテニン経路です。

1. 細胞内除法伝達機構における「カノニカル経路」とは？

• 細胞はWnt-3aファミリーの分子を受容すると、その情報を細胞内情報伝達分子Dishevelled（Dvl）タンパク質へと伝えます（図１左）。これにより活性化したDvlはβ-catenin経路を活性化します。
• 細胞がWnt-5aファミリーの分子を受容した場合も、Dvlが活性化しますが、Wnt-5aの下流で活性化したDvlはPCP経路を活性化します。
• 細胞外情報伝達分子Wntは、動物の個体発生と恒常性の維持において、細胞の増殖・分化・極性・移動を制御します。

発癌に関与する細胞内情報伝達分子Dvlの新規調節機構を解明 https://www.tmd.ac.jp/mri/press/detail/id=58961

1. Wntシグナル研究の歴史と展望～その足跡と未来 2020年8月25日 Journal of Japanese Biochemical Society 92(4): 498-516 (2020) doi:10.14952/SEIKAGAKU.2020.920498 https://seikagaku.jbsoc.or.jp/10.14952/SEIKAGAKU.2020.920498/data/index.html Int1のトランスジェニックマウスが生後6か月で乳がんを発症することも示され18），Int1は原がん遺伝子であると位置づけられるようになった．さらに，1987年にInt1はショウジョウバエのDNAにも存在することが判明し，その塩基配列が決定され，Drosophila int1（Dint-1）は，同年に塩基配列が報告されたショウジョウバエのwinglessと同一であることが決定した19, 20）．ここで初めて，無脊椎動物の発生に関わる遺伝子と，哺乳動物のがんに関わる遺伝子が高い相同性（アミノ酸レベルで53％同一）を有することが明らかになった．‥　Int1欠損マウスは中脳と小脳の発生に異常が認められた．‥　MMTVプロウイルスを挿入することにより，活性化される遺伝子‥　Int1に類似している遺伝子群だけをWnt（Wingless-related integration site）と呼ぶようになった28）．

Canonical and Non-Canonical Wnt Signaling Generates Molecular and Cellular Asymmetries to Establish Embryonic Axes　J. Dev. Biol. 2024, 12(3), 20; https://doi.org/10.3390/jdb12030020　MDPI誌　https://www.mdpi.com/2221-3759/12/3/20

BMP（骨形成因子）の阻害因子

BMPはTGF-βスーパーファミリー（TGF-β、BMPs、Activin)のなかのサブファミリーの一つです。

Noggin

BMP4に高親和性で結合し、その活性を阻害する

1. Expression cloning of noggin, a new dorsalizing factor localized to the Spemann organizer in Xenopus embryos W C Smith 1, R M Harland　Cell 1992 Sep 4;70(5):829-40. doi: 10.1016/0092-8674(92)90316-5. 　要旨より zygotic transcripts are initially restricted to the presumptive dorsal mesoderm and reach their highest levels at the gastrula stage in the dorsal lip of the blastopore (Spemann organizer). In the neurula, noggin is transcribed in the notochord and prechordal mesoderm. The activity of exogenous noggin RNA in embryonic axis induction

最初の論文は１９９２年のセルペーパーでした。

この論文を読むとUV照射により腹側化したカエル卵にnoggin ｍRNAを注入したときに体軸ができたというデータを見せていますが、単に腹側に打ったら2次軸ができたというデータはありません。UV照射が不完全であればもともとの1次軸ができてしまうので、この実験は結構微妙な実験だと思います。UV照射・mRNA無しの実験結果で5匹の胚を示していますが、容易にバイアスがかかりそう。

2次軸はできるのでしょうか、できないのでしょうか？Consensusに訊いてみました。

1. ノギンmRNAの腹側注入による部分的な二次軸形成:ノギンmRNAを腹側に注入すると、部分的な二次軸が形成されるが、頭部構造は形成されない
2. 。ノギンmRNAの他の部位への注入による完全な二次軸形成:ノギンmRNAを他の部位（例えば、動物極近く、辺縁帯、植物極）に注入すると、完全な二次軸が形成される。
3. ノギンのBMPシグナル抑制機能:ノギンはBMPシグナルを抑制することで二次軸を誘導する。
4. ノギンと他の因子の相互作用:ノギンは他の因子（例えば、Nodal関連遺伝子やWntシグナル）と協力して完全な二次軸を形成する。

consensus.app

1. Ectopic expression of Xenopus noggin RNA induces complete secondary body axes in embryos of the direct developing frog Eleutherodactylus coqui Development Genes and Evolution 　Volume 210, pages 21–27, (2000)　https://link.springer.com/article/10.1007/PL00008184

Chordin

1. Xenopus chordin: A Novel Dorsalizing Factor Activated by Organizer-Specific Homeobox Genes Yoshiki Sasai 1, Bin Lu 1, Herbert Steinbeisser 1, Douglas Geissert 1, Linda K Gont 1, Eddy M De Robertis Cell. 1994 Dec 2;79(5):779–790. doi: 10.1016/0092-8674(94)90068-x https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC3082463/ (無料著者原稿）Seventy years after the organizer experiment (Spemann and Mangold, 1924), the quest to isolate the factors released by the organizing centers to recruit neighboring cell continues. 要旨 Microinjection of chordin mRNA induces twinned axes

最初の論文は１９９４年のセル論文でした。

Follistatin

1. Follistatin, an antagonist of activin, is expressed in the Spemann organizer and displays direct neuralizing activity A Hemmati-Brivanlou 1, O G Kelly, D A Melton Cell . 1994 Apr 22;77(2):283-95. doi: 10.1016/0092-8674(94)90320-4.

最初の報告は１９９４年のCellペーパーでした。

1. フォリスタチンmRNAの注入は、ゼノパス胚において異常な発達を引き起こし、特に脊索形成に影響を与えることが示されていますが、二次軸形成を直接誘導するという明確な証拠は提供されていません。他のmRNA（Xwnt-8、Wnt-1、Activin、xFKBP1Bなど）は、二次軸形成を誘導する能力を持つことが示されています。(Consensus.ai)

実はBMP阻害因子であるNoggin, Chordin, Follistatinは頭部を含む完全な2次軸は形成しなかったんですね。つまり他のシグナルと協同して働くということのようです。

Cerberus

1. Protein Related to DAN and Cerberus Is a Bone Morphogenetic Protein Antagonist That Participates in Ovarian Paracrine Regulation* Journal of Biological Chemistry Volume 279, Issue 22p23134-23141May 2004  https://www.jbc.org/article/S0021-9258(20)66678-9/fulltext

Wntシグナル経路の阻害因子

Cerberus

CerberusはWntシグナルを阻害するだけでなく、BMPの阻害やnodalシグナルの阻害もします。

Figrure 4. Model of the formation and function of anterior endoderm in Xenopus head development.

The head inducer Cerberus is a multifunctional antagonist of Nodal, BMP and Wnt signals　Nature volume 397, pages707–710 (1999)

https://www.nature.com/articles/17820

cerberusはWntリガンドと直接結合することによりWntシグナリングを抑制します。

https://www.sciencedirect.com/topics/biochemistry-genetics-and-molecular-biology/cerberus-protein

1. Cerberus is a head-inducing secreted factor expressed in the anterior endoderm of Spemann’s organizer Tewis Bouwmeester, Sung-Hyun Kim, Yoshiki Sasai, Bin Lu & Eddy M. De Robertis Nature volume 382, pages595–601 (1996) 15 August 1996.

最初の報告は１９９６年のネイチャー論文でした。

1. Head organizer: Cerberus and IGF cooperate in brain induction in Xenopus embryos Yagmur Azbazdar 1, Edgar M Pera 2, Edward M De Robertis 3 Cells Dev . 2023 Dec 16:203897. doi: 10.1016/j.cdev.2023.203897. イントロダクションより Cerberus induces small head structures containing brain, eyes, olfactory placodes, and sometimes a second heart, that are devoid of trunk-tail structures and posterior neural tissue.
2. Molecular link in the sequential induction of the Spemann organizer: direct activation of the cerberus gene by Xlim-1, Xotx2, Mix.1, and Siamois, immediately downstream from Nodal and Wnt signaling　Developmental Biology Volume 257, Issue 1, 1 May 2003, Pages 190-204
3. Expression of the mouse cerberus-related gene, Cerr1, suggests a role in anterior neural induction and somitogenesis William Shawlot 1, Jian Min Deng 1, Richard R Behringer 1,*　Proc Natl Acad Sci U S A. 1998 May 26;95(11):6198–6203. doi: 10.1073/pnas.95.11.6198

Dickkopf (Dkk)

1. Head inducer Dickkopf-1 is a ligand for Wnt coreceptor LRP6 Current Biology Volume 11, Issue 12, 26 June 2001, Pages 951-961  The Wnt family of secreted growth factors initiates signaling via the Frizzled (Fz) receptor and its candidate coreceptor, LDL receptor-related protein 6 (LRP6), presumably through Fz-LRP6 complex formation induced by Wnt. ‥　Dkk-1 is a high-affinity ligand for LRP6 and inhibits Wnt signaling by preventing Fz-LRP6 complex formation induced by Wnt. Dkk-1 binds neither Wnt nor Fz, nor does it affect Wnt-Fz interaction.　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0960982201002901

Frzb (Frizzled-related protein)

1. Genes Dev. 1999 Sep 1;13(17):2328–2336. doi: 10.1101/gad.13.17.2328 Axis determination by inhibition of Wnt signaling in Xenopus Keiji Itoh 1, Sergei Y Sokol 1,1 we interfered with Wnt signaling in the embryo using the extracellular domain of Xenopus Frizzled 8 (ECD8), which blocks Wnt-dependent activation of a target gene in Xenopus ectodermal explants. Expression of ECD8 in ventral blastomeres resulted in formation of secondary axes この論文は内在的な分子の話ではなく、Wntシグナリングを阻害したときの効果（２次軸形成）をみるための実験

nodalの阻害因子

cerberus

cerberusは、Wntの阻害因子でもあり、BMP（TGF-βスーパーファミリー）の阻害因子でもありますが、nodal（TGF-βスーパーファミリー）の阻害因子でもあります。多才ですね。

Human Cerberus Prevents Nodal-Receptor Binding, Inhibits Nodal Signaling, and Suppresses Nodal-Mediated Phenotypes PLOS ONE January 201510(1):e0114954 DOI:10.1371/journal.pone.0114954 SourcePubMed LicenseCC BY 4.0 https://www.researchgate.net/publication/271219306_Human_Cerberus_Prevents_Nodal-Receptor_Binding_Inhibits_Nodal_Signaling_and_Suppresses_Nodal-Mediated_Phenotypes

https://www.researchgate.net/figure/The-Nodal-signaling-pathway-Genetic-interaction-and-co-Immunoprecipitation-co-IP_fig10_271219306

1.  Nodal antagonists regulate formation of the anteroposterior axis of the mouse embryo. Yamamoto M, Saijoh Y, Perea-Gomez A, Shawlot W, Behringer RR, Ang SL, Hamada H, Meno C. Nature. 2004;428:387–392. doi: 10.1038/nature02418. Abstract Patterning of the mouse embryo along the anteroposterior axis during body plan development requires migration of the distal visceral endoderm (DVE) towards the future anterior side by a mechanism that has remained unknown. Here we show that Nodal signalling and the regionalization of its antagonists are required for normal migration of the DVE. Whereas Nodal signalling provides the driving force for DVE migration by stimulating the proliferation of visceral endoderm cells, the antagonists Lefty1 and Cerl determine the direction of migration by asymmetrically inhibiting Nodal activity on the future anterior side. https://www.nature.com/articles/nature02418 本文読めた　To confirm the role of Nodal antagonists in A–P patterning, we analysed mutant mice lacking Lefty1 or Cerl. Lefty1^-/- (ref. 13) and Cerl^-/- (refs 6, 14, 15) embryos undergo normal gastrulation, whereas Cerl^-/-,Lefty1^-/- embryos develop multiple primitive streaks⁸, suggestive of functional redundancy between Lefty1 and Cerl. We first examined expression of the AVE marker Hex (Fig. 5a, b, h, i). The Hex expression domain was expanded slightly in Cerl^-/- and Lefty1^-/- mutants (data not shown) and markedly in the Cerl^-/-,Lefty1^-/- double mutant (Fig. 5b, i), in which cells positive for Hex transcripts occupied the entire anterior half of the VE at E6.5 (n = 4). These results reveal that the Nodal antagonists restrict the size or location of the AVE, perhaps by inhibiting the proliferation of AVE cells.

nodalはTGF-βファミリーの一員です。cereberusとLeftyはnodalの阻害因子として働きます。ちなみにcereberusはWntも阻害します。

a Following implantation, Nodal is expressed throughout the epiblast and plays a role in specifying the underlying distal visceral endoderm (DVE). The DVE in response secretes Nodal inhibitors Cerberus and Lefty, generating a posterior-distal gradient of Nodal and forming one of the earliest patterns in the embryo. ExE extra-embryonic ectoderm, VE visceral endoderm, P-D proximal-distal. b The DVE migrates anteriorly to become the anterior visceral endoderm (AVE) concentrating Nodal further to the proximal and newly formed posterior axis by continued secretion of Nodal inhibitors. A-P anterior-posterior. c In a process that requires high levels of Nodal, gastrulation begins with formation of the early primitive streak. Epiblast cells undergo EMT and migrate with subsequent differentiation into mesoderm and endoderm lineages. Inset: Pro-Nodal expressed in the epiblast upregulates Furin, Pace4, and BMP4 within the ExE. Furin and Pace4 subsequently process pro-Nodal and BMP4 stimulates Wnt3 signaling in the epiblast. Wnt3 acts on a Nodal proximal epiblast enhancer to increase Nodal expression. Nodal also amplifies its own signal through an enhancer region in intron 1 stimulated by Smad2/3-FoxH1, collectively increasing levels of Nodal in the proximal epiblast.

Plasticity underlies tumor progression: Role of Nodal signaling March 2016 Cancer and Metastasis Reviews 35(1) DOI:10.1007/s10555-016-9605-5 https://www.researchgate.net/figure/Role-of-Nodal-in-the-early-mouse-embryo-a-Following-implantation-Nodal-is-expressed_fig8_297661953

Epiblastの細胞がnodalを発現して分泌し、distal visceral endoderm (DVE)に働きかけます。するとDVEではnodalの阻害因子であるcerberus とLeftyを発現して、近くの細胞でのnodalの発現を抑制します。DVEは移動してAVEになりますが、するとAVE側のepiblastにおいてもnodalの発現は抑制されるので、AVEの反対側でnodalの発現が高いという状況が生まれます。このnodalシグナルがprimitive streakを引き起こすと考えられています。

1. Nodal signaling from the visceral endoderm is required to maintain Nodal gene expression in the epiblast and drive AVE migration Amit Kumar 1,†, Margaret Lualdi 2, George T Lyozin 3, Prashant Sharma 1, Jadranka Loncarek 1, Xin-Yuan Fu 4, Michael R Kuehn　Dev Biol. Author manuscript; available in PMC: 2016 Apr 1. Published in final edited form as: Dev Biol. 2014 Dec 20;400(1):1–9. doi: 10.1016/j.ydbio.2014.12.016 https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC4806383/　要旨より  The Nodal gene is expressed in both the VE and in the pluripotent epiblast, which gives rise to the germ layers. Previous findings have provided conflicting evidence as to the relative importance of Nodal signaling from the epiblast vs. VE for AP patterning.

その他

Goosecoid

アクチビン、Vg1、Xwnt-8、ノギンなどは、それぞれの細胞表面受容体を介して異なる細胞内シグナル伝達経路を開始し、最終的にgoosecoid (gsc) 遺伝子の発現を誘導

1. Molecular Nature of Spemann’s Organizer: the Role of the Xenopus Homeobox Gene goosecoid Ken W Y Cho 1,*, Bruce Blumberg 1, Herbert Steinbeisser 1, Eddy M De Robertis 1 Cell. 1991 Dec 20;67(6):1111–1120. doi: 10.1016/0092-8674(91)90288-a https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC3102583/ 著者原稿無料PDF https://linkinghub.elsevier.com/retrieve/pii/009286749190288A 本文有料

goosecoid (gsc)がオーガナイザーの正体なのだとしたら、gsc遺伝子をノックアウトすれば、体軸を形成できないはずと予想されますが、予想に反してgscノックアウトマウスの表現型は、それほど大きくなかったようです。不思議です。

1. Nasal and pharyngeal abnormalities caused by the mouse goosecoid gene mutation　Biochem Biophys Res Commun . 1997 Apr 7;233(1):161-5. doi: 10.1006/bbrc.1997.6315.　https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/9144415/

Lim-1

1. Role of the LIM class homeodomain protein Xlim-1 in neural and muscle induction by the Spemann organizer in Xenopus M Taira 1, H Otani, J P Saint-Jeannet, I B Dawid Nature . 1994 Dec 15;372(6507):677-9. doi: 10.1038/372677a0. https://www.nature.com/articles/372677a0
2. Requirement for Lim1 in head-organizer function W Shawlot 1, R R Behringer Nature  1995 Mar 30;374(6521):425-30. doi: 10.1038/374425a0.　Embryos homozygous for the null allele lacked anterior head structures but the remaining body axis developed normally.

カエルで発見されマウスでも役割が確認され、それぞれ１９９４年、１９９５年のネイチャー誌に報告されました。

1. Functional domains of the LIM homeodomain protein Xlim-1 involved in negative regulation, transactivation, and axis formation in Xenopus embryos I Hiratani 1, T Mochizuki, N Tochimoto, M Taira Dev Biol . 2001 Jan 15;229(2):456-67. doi: 10.1006/dbio.2000.9986.

シュペーマンのオーガナイザーを誘導するシグナル

アクチビン、Vg1、Xwnt-8、ノギンがそれぞれの細胞表面受容体を介して異なる細胞内シグナル伝達経路を開始し、最終的にgoosecoid (gsc) 遺伝子の発現を誘導

Wntシグナル経路

Siamois Siamois遺伝子はWntシグナル経路のターゲットで、オーガナイザー活性を誘導する。Siamoisは中胚葉誘導を経ずにオーガナイザー特異的遺伝子を活性化し、背側化シグナルを生み出す

Xenopus nodal-related (Xnr) : Xnr因子はアクチビン様分子によって誘導され頭部オーガナイザーを形成。

TGF-β経路とWntシグナル経路のクロストーク

シュペーマンのオーガナイザーの形成には、TGF-βシグナル経路とWntシグナル経路の相互作用が必要です。これらの経路は、胚の動物極から植物極にかけての細胞の運命を決定します。

オーガナイザー分子ではないが重要な中胚葉マーカー

Brachyury

（マウス） anterior visceral endodermで発現する分子

Otx2

1. Sequential roles for Otx2 in visceral endoderm and neuroectoderm for forebrain and midbrain induction and specification M Rhinn 1, A Dierich, W Shawlot, R R Behringer, M Le Meur, S L Ang Development . 1998 Mar;125(5):845-56. doi: 10.1242/dev.125.5.845.

nodal

1. Nodal is a novel TGF-beta-like gene expressed in the mouse node during gastrulation X Zhou 1, H Sasaki, L Lowe, B L Hogan, M R Kuehn Nature . 1993 Feb 11;361(6412):543-7. doi: 10.1038/361543a0. 本文有料　要旨より Here we isolate a candidate for the mutated gene which encodes a new member of the transforming growth factor-beta (TGF-beta) superfamily. Expression is first detected in primitive streak-stage embryos at about the time of mesoderm formation. It then becomes highly localized in the node at the anterior of the primitive streak. This region is analogous to chick Hensen’s node and Xenopus dorsal lip (Spemann’s organizer), which can induce secondary body axes when grafted into host embryos (reviewed in refs 5 and 6).

ノーダル遺伝子の同定もネイチャー論文でした。

1. Nodal signalling in the epiblast patterns the early mouse embryo J Brennan 1, C C Lu, D P Norris, T A Rodriguez, R S Beddington, E J Robertson Nature . 2001 Jun 21;411(6840):965-9. doi: 10.1038/35082103.  要約より　Nodal signals from the epiblast also pattern the visceral endoderm by activating the Smad2-dependent pathway required for specification of anterior identity in overlying epiblast cells.

ノーダルのマウス初期発生における役割の解析もネイチャー論文になりました。

1. Nodal signaling from the visceral endoderm is required to maintain Nodal gene expression in the epiblast and drive AVE migration　Dev Biol. 2014 Dec 20;400(1):1–9. doi: 10.1016/j.ydbio.2014.12.016 https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC4806383/　conditional mutagenesis of the Nodal gene specifically within the VE leads to reduced Nodal expression levels in the epiblast and incomplete or failed AVE migration
2. Nodal Signaling Activates Differentiation Genes During Zebrafish Gastrulation James T Bennett 1, Katherine Joubin 1,3, Simon Cheng 1,2, Pia Aanstad 4,5, Ralf Herwig 4, Matthew Clark 3,4, Hans Lehrach 4, Alexander F Schier 1,6　Dev Biol. 2007 Jan 12;304(2):525–540. doi: 10.1016/j.ydbio.2007.01.012　https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC1885460/
3. Nodal specifies embryonic visceral endoderm and sustains pluripotent cells in the epiblast before overt axial patterning Development . 2006 Jul;133(13):2497-505. doi: 10.1242/dev.02413. Epub 2006 May 25. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/16728477/  (B,C) The PrE also expresses the DVE markers Lefty1 (B), Hex and a HexP-GFP reporter transgene(C), whereas Cer1 mRNA is below detectable levels (B). Lefty1 and Hex transcripts are clearly downregulated between E5.0 and 5.25 before they reappear together with Cer1 mRNA in the most distal VE cells at E5.5. https://journals.biologists.com/dev/article/133/13/2497/52434/Nodal-specifies-embryonic-visceral-endoderm-and
4. Multiple roles for Nodal in the epiblast of the mouse embryo in the establishment of anterior-posterior patterning Cindy C Lu 1, Elizabeth J Robertson　Dev Biol . 2004 Sep 1;273(1):149-59. doi: 10.1016/j.ydbio.2004.06.004. https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/15302604/
5. The Foxh1-dependent autoregulatory enhancer controls the level of Nodal signals in the mouse embryo Dominic P. Norris, Jane Brennan, Elizabeth K. Bikoff, Elizabeth J. Robertson　15 July 2002 　https://journals.biologists.com/dev/article/129/14/3455/41736/The-Foxh1-dependent-autoregulatory-enhancer
6. nodal expression in the primitive endoderm is required for specification of the anterior axis during mouse gastrulation I Varlet 1, J Collignon, E J Robertson Development . 1997 Mar;124(5):1033-44. doi: 10.1242/dev.124.5.1033.
7. A Xenopus nodal-related gene that acts in synergy with noggin to induce complete secondary axis and notochord formation K. D. Lustig, K. Kroll, E. Sun, R. Ramos, H. Elmendorf, M. W. Kirschner Author and article information Development (1996) 122 (10): 3275–3282.　　https://journals.biologists.com/dev/article/122/10/3275/38985/A-Xenopus-nodal-related-gene-that-acts-in-synergy

Cripto

Criptoはアクチビンと結合してアクチビンシグナリングを抑制することはあるようです。しかし、ノーダルに関しては、ノーダルシグナリングの重要な要素コレセプターcoreceptorとしてポジティブに働くようです。ただし、Criptoを介さないノーダルシグナリングもあり得るようです。

1. Cripto-independent Nodal signaling promotes positioning of the A-P axis in the early mouse embryo. G. Liguori, A. Borges, A. Borges+9 more · Developmental Biology Volume 315, Issue 2, 15 March 2008, Pages 280-289　2008年3月15日　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0012160607016351

その他の論文

1. The HPE gene CRIPTO/oep physically interacts with the ligand–receptor complex, and is required for Nodal signal transduction, positioning this protein as a Nodal co-receptor [40–43]. https://en.wikipedia.org/wiki/Nodal_signaling_pathway
2. EGF-CFC proteins are membrane bound extracellular factors that serve as essential cofactor in Nodal signaling and in vertebrate development as a whole. This family of cofactors includes One-eyed Pinhead (oep) in Zebrafish, FRL1 in Xenopus, and Cripto and Criptic in mouse and human. https://en.wikipedia.org/wiki/Nodal_signaling_pathway
3. the activity of Nodal requires epidermal growth factor-Cripto/FRL-1/Cryptic (EGF-
   CFC) co-receptors such as Cripto and Cryptic (Tdgf1 and Cfc1 –
   Mouse Genome Informatics) (Reissmann et al., 2001; Yan et al.,
   2002; Yeo and Whitman, 2001). In particular, membrane-bound
   Cripto appears to recruit Nodal to an activin receptor complex
   composed of a dimer of the type I serine-threonine receptor Alk4
   (Acvr1b) and a dimeric type II activin receptor, either ActRII or
   ActRIIB (Acvr2a or Acvr2b – Mouse Genome Informatics). https://www.researchgate.net/publication/51591179_Regulation_of_extra-embryonic_endoderm_stem_cell_differentiation_by_Nodal_and_Cripto_signaling

Mature Nodal binds to the Activin receptors I and II and the co-receptor Cripto/Criptic and phosphorilates Smad2 /3. https://en.wikipedia.org/wiki/Nodal_signaling_pathway

nodalもアクチビンもTGF-βスーパーファミリーの一員です。アクチビン受容体の種類としては、Nodalに特化した受容体としてはALK7があります。Activinは主にALK4を介してシグナルを伝達します。

1. The orphan receptor ALK7 and the Activin receptor ALK4 mediate signaling by Nodal proteins during vertebrate development. document Genes & developmentEva Reissmann et al.

TGF-βファミリー分子に対する受容体として，7種類のI型受容体，5種類のII型受容体が存在し，それらすべての受容体は細胞内領域にセリン／トレオニンキナーゼドメインを持つ．ジスルフィド結合により二量体を形成しているTGF-βは，2分子のTGF-β I型受容体と2分子のTGF-β II型受容体からなるヘテロ四量体に結合する（図2）．リガンドがTGF-β II型受容体に結合すると，TGF-β II型受容体キナーゼはTGF-β I型受容体の膜貫通領域直下に存在するGS領域と呼ばれるグリシンとセリンに富んだドメインのセリンとトレオニン残基をリン酸化し，I型受容体内で不活性化されていたセリン／トレオニンキナーゼ酵素活性が出現する．TGF-βと同様にアクチビンは，アクチビンI型受容体（ALK4）とアクチビンII型受容体（ActRIIまたはActRIIB）が複合体を形成し，BMPの場合BMPI型受容体（ALK2, 3, 6）とBMP II型受容体（ActRII，ActRIIBまたはBMPRII）が複合体を形成する．活性化したI型受容体キナーゼはR-Smad（receptor-regulated Smad）タンパク質のC末端に存在する2個のセリン残基をリン酸化する．

Journal of Japanese Biochemical Society 89(2): 145-153 (2017) doi:10.14952/SEIKAGAKU.2017.890145 TGF-βシグナルを抑制するTMEPAIファミリー 2017年4月25日　https://seikagaku.jbsoc.or.jp/10.14952/SEIKAGAKU.2017.890145/data/index.html

HEX

HEXはHHEXと呼ばれることもありますが同一の遺伝子です（ChatGPT 4o）。hematopoietically expressed homeobox gene から、HexまたはHhexと呼ばれます。

• Hhex has been found to be an important transcription factor in embryogenesis because Hhex^−/− mice display embryonic lethality starting at embryonic day E10.5 to E11.5 due to impaired forebrain, liver, and thyroid development.^8–10
• Hhex expression is initially seen in the blood islands of the yolk sac at the same time Flk-1 expression is initiated.⁹

https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC2938236/

HEXが転写因子として、Cerberus(Wnt, BMP, Nodalのアンタゴニスト)やLefty（TGF-β superfamilyメンバーでNodal signalingを調節）の遺伝子を直接（プロモーターに結合して）制御するのかと思ったのですが、そういうわけではないようです。Cerberusに関しては、HEXによる遺伝子の制御は間接的に起こるようです。Leftyに関しては、遺伝子制御に関する報告がなさそうです（ChatGPT4oの回答）。

1.  AVE protein expression and visceral endoderm cell behavior during anterior–posterior axis formation in mouse embryos: Asymmetry in OTX2 and DKK1 expression　Hideharu Hoshino, Go Shioi, Shinichi Aizawa　Developmental Biology Volume 402, Issue 2, 15 June 2015, Pages 175-191 Developmental Biology　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0012160615001748
2. An anterior signalling centre in Xenopus revealed by the homeobox gene XHex C.Michael Jones1 jonesm@icr.ac.uk ∙ Joanne Broadbent2 ∙ Paul Q. Thomas3 ∙ James C. Smith4 ∙ Rosa S.P. Beddington3　Current Biology　Volume 9, Issue 17p946-S1-954September 09, 1999 https://www.cell.com/current-biology/fulltext/S0960-9822(99)80421-7　　 (f) Animal pole view of stage 10.5 gastrula shows that cerberus expression is detected in a wider domain of the deep endoderm than is XHex (b). 背景より In Xenopus, the putative head inducer cerberus is expressed initially in deep endodermal cells adjacent to the involuting tissues of Spemann’s organiser [7]. Is this tissue the equivalent of the anterior visceral endoderm in the early mouse and rabbit embryo? Here, we have addressed this question by analysing the expression and function of XHex, the Xenopus cognate of murine Hex (also known as Prh) [8,9].

DEVからAVEへの細胞移動

1. Nodal signaling from the visceral endoderm is required to maintain Nodal gene expression in the epiblast and drive AVE migration　Dev Biol. 2014 Dec 20;400(1):1–9. doi: 10.1016/j.ydbio.2014.12.016　https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC4806383/　
2. Induction and migration of the anterior visceral endoderm is regulated by the extra-embryonic ectoderm Tristan A Rodriguez 1, Shankar Srinivas, Melanie P Clements, James C Smith, Rosa S P Beddington　Development . 2005 Jun;132(11):2513-20. doi: 10.1242/dev.01847. Epub 2005 Apr 27.

中胚葉誘導と体軸形成との関係

Mesoderm induction and axis formation are tightly correlated processes in developmental biology, particularly during early embryogenesis. Here’s how they are interconnected:

1. Mesoderm Induction: This process begins during gastrulation, where signaling molecules like Nodal, BMP, and Wnt help induce the formation of mesoderm from the epiblast. The mesoderm gives rise to various tissues, including muscles, bones, and the circulatory system.
2. Organizer and Axis Formation: The Spemann-Mangold organizer (in amphibians) or the Hensen’s node (in mammals) plays a central role in both mesoderm induction and the formation of the body axis. The organizer secretes BMP antagonists (such as Chordin, Noggin, and Follistatin) that create a dorsal-ventral gradient essential for patterning the mesoderm and establishing the anterior-posterior and dorsal-ventral axes.
3. Signaling Pathways:
   • Nodal signaling: Initiates mesoderm formation and is essential for the primitive streak formation, which defines the body axis (anterior-posterior).
   • BMP inhibition by molecules like Chordin and Noggin, secreted from the organizer, is crucial for dorsalization and axis formation. Without this inhibition, mesoderm would not form correctly, leading to a lack of proper axis formation.

In summary, mesoderm induction and axis formation are closely linked, with key signaling molecules from the organizer region guiding both the formation of mesodermal tissue and the establishment of the body axis during early development.

1. ChatGPT 4o

In mice, around embryonic day (E) 6.0, at the time when gastrulation begins, mouse PGCs (mPGCs) are specified as about 10 cells in the most posterior part of epiblast, the cup-shaped simple pluripotent epithelium, from which all of the embryonic portion are derived (Fig. 1.1). This process occurs in response to bone morphogenetic protein 4 (BMP4) [25] produced by the extraembryonic ectoderm (ExE), an extraembryonic part of conceptus in intimate contact with the edge of the epiblast (Fig. 1.1).　https://www.sciencedirect.com/topics/engineering/extraembryonic-ectoderm

ヒトの発生は、受精後3週目に中胚葉誘導、原腸陥入が起こります。ヒトで原腸陥入の時期の観察をすることは不可能なので、同時期の動物モデルからヒトの場合を類推するしかありません。

原始線条 primitive streak

ニワトリ卵の原始線条 primitive streak形成の様子。

Chick Primitive Streak BioProfessor101 チャンネル登録者数 2.15万人

1. Migrating mesoderm cells self-organize into a dynamic meshwork structure during chick gastrulation Yukiko Nakaya, Mitsusuke Tarama, Sohei Tasaki, Ayako Isomura, View ORCID ProfileTatsuo Shibata doi: https://doi.org/10.1101/2022.09.08.507227 Posted September 09, 2022. https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2022.09.08.507227v1.full
2. Cell movement during chick primitive streak formation Developmental Biology Volume 296, Issue 1, 1 August 2006, Pages 137-149 細胞の動きを示したsupplementary movie 動画がいくつかあります　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0012160606007299
3. Cell Movement Patterns during Gastrulation in the Chick Are Controlled by Positive and Negative Chemotaxis Mediated by FGF4 and FGF8　Developmental Cell Volume 3, Issue 3, September 2002, Pages 425-437 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1534580702002563　細胞移動の軌跡を示した動画がいくつかあります。FGF8とFGF4の役割についても非常にわかりやすい実験結果

カエルの発生を高校で学びますが、両生類の場合は原口というものがあらわれて、外胚葉の細胞がそこから内部に潜り込んでいって中胚葉の細胞に変化するのでした。しかし鳥類や哺乳類は、原口に相当するものが、原始線条（原条）になります。形が違いますが、細胞が潜り込んでいく場所という点で対応する構造だと考えられます。カエルの原口に馴染んでいた身としてはそれに相当するものが原始線条だといわれてもどうもピンときませんでした。馴染むためには繰り返し勉強するしかありません。

ヒトに近い動物モデルとしてはマウスがありますが、ヒトの胚盤が「円盤」なのに対して、マウスは「カップ状」という形態的に大きな違いがあります。下の図を見ると、proamniotic cavity（羊膜腔になる予定の空間）が確かにカップ状のepiblastによって囲まれているのがわかります。下のCell論文の図は非常に明解に描かれています。basal membrane と apical 側との違いもわかりやすいと思います。カップ状になる過程が描かれています。

Self-Organizing Properties of Mouse Pluripotent Cells Initiate Morphogenesis upon Implantation Cell Volume 156, Issue 5p1032-1044February 27, 2014 https://www.cell.com/fulltext/S0092-8674%2814%2900075-0

AEV特異的マーカータンパク質の早期の時期における発現

1. AVE protein expression and visceral endoderm cell behavior during anterior-posterior axis formation in mouse embryos: Asymmetry in OTX2 and DKK1 expression. Developmental biology Hideharu Hoshino et al. 36 citations 2015 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0012160615001748 AVEマーカータンパク質のステージE4.5の時期の発現　

遠位内臓内胚葉（Distal Visceral Endoderm, DVE）

マウス胚における遠位内臓内胚葉（Distal Visceral Endoderm, DVE）は、胚の前後軸（Anterior-Posterior, A-P）形成において重要な役割を果たします。DVEは、特定の遺伝子を発現し、将来の前部内臓内胚葉（Anterior Visceral Endoderm, AVE）へと移動します。このプロセスに関与する遺伝子の発現パターンを理解することは、胚の発生メカニズムを解明する上で重要です。

OTX2, HHEX, CER1, LEFTY1, DKK1の発現:

DVEは、OTX2, HHEX, CER1, LEFTY1, DKK1を発現します。これらの遺伝子は、E4.5からE6.5の間に特定のパターンで発現し、AVEの形成に寄与します。

1. AVE protein expression and visceral endoderm cell behavior during anterior-posterior axis formation in mouse embryos: Asymmetry in OTX2 and DKK1 expression. Developmental biology Hideharu Hoshino et al. 36 citations 2015 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0012160615001748 ステージE5.25-5.75でのAVEタンパク質のDVEにおける発現 OTX2、HHEX、CER1、LEFTY1、および DKK1 は、マウス胚の遠位内臓内胚葉 (DVE) で発現します。

LEFTY1の非対称発現:

LEFTY1は、DVEおよびAVEのマーカーとして機能し、E3.5からE5.5の間に非対称に発現します。この非対称性は、Nodalシグナルによって誘導され、DVEの移動方向を決定します。

1. The Mouse Embryo Autonomously Acquires Anterior-Posterior Polarity at Implantation　Developmental Cell　Volume 10, Issue 4P451-459April 2006　https://www.cell.com/action/showPdf?pii=S1534-5807%2806%2900114-6

Nodalシグナルの役割:

Nodalシグナルは、DVEの生成と移動に重要な役割を果たします。Nodal遺伝子は、内胚葉および多能性エピブラストで発現し、DVE/AVEの移動を駆動します。

1. 1. Nodal signaling from the visceral endoderm is required to maintain Nodal gene expression in the epiblast and drive DVE/AVE migration　Developmental Biology Volume 400, Issue 1, 1 April 2015, Pages 1-9 Developmental Biology　https://pdf.sciencedirectassets.com/272543/1-s2.0-S0012160615X00054/1-s2.0-S0012160614006460/main.pdf

Hex遺伝子の発現:

Hexは、E5.5でDVEの一部として発現し、その後、前部に移動します。Hexの発現は、胚の前後軸の最も早期の分子非対称性を示します。

1. Hex: a homeobox gene revealing peri-implantation asymmetry in the mouse embryo and an early transient marker of endothelial cell precursors　Development . 1998 Jan;125(1):85-94. doi: 10.1242/dev.125.1.85. 　https://journals.biologists.com/dev/article/125/1/85/39778/Hex-a-homeobox-gene-revealing-peri-implantation

新規遺伝子の発見:

Adtk1などの新規遺伝子がAVEで発現し、これらの遺伝子は胚の発生において重要な役割を果たす可能性があります。

マウス胚の遠位内臓内胚葉（DVE）は、OTX2, HHEX, CER1, LEFTY1, DKK1などの遺伝子を発現し、これらの遺伝子はDVEの移動と前後軸の形成に重要な役割を果たします。特にLEFTY1とNodalシグナルは、DVEの非対称性と移動方向を決定する上で重要です。さらに、HexやAdtk1などの遺伝子もDVEおよびAVEの形成に関与しています。(consensus.ai)

DVEの移動：AVE

Distal Vesceral Endoderm (DVE)の細胞が最初はカップ状の胚の極のところに生じますが、それが端に移動してAnterior Viscereal Endoderm （AVE）になります。

From fertilization to gastrulation: axis formation in the mouse embryo.　Curr Opin Genet Dev . 2001 Aug;11(4):384-92. DOI:10.1016/S0959-437X(00)00208-2Corpus ID: 17925624

Vertebrate Axial Patterning: From Egg to Asymmetry.　Advances in Experimental Medicine and Biology, 01 Jan 2017, 953:209-306 https://doi.org/10.1007/978-3-319-46095-6_6 PMID: 27975274 PMCID: PMC6550305　https://europepmc.org/article/pmc/pmc6550305

DVEがAVEの位置に移動するためにはnodalシグナルが必要なようです。

1. Nodal signaling from the visceral endoderm is required to maintain Nodal gene expression in the epiblast and drive DVE/AVE migration　Developmental Biology Volume 400, Issue 1, 1 April 2015, Pages 1-9 Developmental Biology　https://pdf.sciencedirectassets.com/272543/1-s2.0-S0012160615X00054/1-s2.0-S0012160614006460/main.pdf

AVEで発現する遺伝子

1. AVE protein expression and visceral endoderm cell behavior during anterior-posterior axis formation in mouse embryos: Asymmetry in OTX2 and DKK1 expression. Developmental biology Hideharu Hoshino et al. 36 citations 2015 https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0012160615001748 ステージE6.5でのAVEにおける特異的なタンパク質の発現

AVEが発現する分泌シグナル分子

マウスの初期胚における前部内臓内胚葉（AVE）は、胚の前後軸の形成に重要な役割を果たします。AVEは、成長因子シグナルを拮抗する分泌因子を発現することでその機能を果たします。

• Wntシグナルの拮抗因子:Secreted frizzled-related protein 5 (Sfrp5) は、Wntシグナルを拮抗する分泌因子であり、AVEおよび前腸内胚葉で発現します。Dkk1もまた、Wntシグナルを拮抗する分泌因子であり、AVEで発現します。
• TGFβシグナルの拮抗因子:AVEは、Nodalシグナルを抑制するTGFβ拮抗因子を分泌します。
• 成長分化因子:Growth-differentiation factor 3 (Gdf3) は、Nodalシグナル経路に関与し、AVEの形成に重要な役割を果たします。
• その他の分泌因子:Bone morphogenetic protein 4 (Bmp4) は、AVEの発達と移動を調節するシグナル分子です。

マウスの初期胚において、AVEはWntシグナルを拮抗するSfrp5やDkk1、TGFβシグナルを抑制する因子、そしてGdf3などの成長分化因子を分泌します。これらの分子は、胚の前後軸の形成やAVEの発達に重要な役割を果たします。(consensus.ai)

マウスの原始線条

マウスの胚はカップ状になっているため、原始線条のイメージが湧きにくく、他との比較もしにくいと思いますが、下の論文の図ではカップを平らにした状態のイメージ図も描かれており、理解を助けてくれます。

Axis Development and Early Asymmetry in Mammals　Cell　Volume 96, Issue 2p195-209 January 22, 1999 https://www.cell.com/fulltext/S0092-8674%2800%2980560-7

マウス胚での中胚葉誘導の始まり：extraembryonic ectodermからのBMP4シグナル

• At the blastocyst stage, the polar TE lies adjacent to the epiblast and is fated to form the extraembryonic ectoderm and ectoplacental cone, which will subsequently form the fetal portion of the placenta, whereas the mural TE initially encloses the blastocyst cavity and eventually forms the outer layer of the parietal yolk sac.
• Between E5.5 and E6.0, the proamniotic cavity expands to the extraembryonic ectoderm, forming the proamniotic canal.

 

1. https://www.sciencedirect.com/topics/engineering/extraembryonic-ectoderm

下の図のシグナル分子のまとめが非常にわかりやすいと思いました。しかし緑の背景に白抜きの文字は読みにくい。extraembryonic ectodermがBMP4を分泌し、BMP受容体１がそのシグナルを受容して、結果として中胚葉マーカーであるT遺伝子が発現します。これは尾部で起こります。ところが、吻側においては、HEX遺伝子を発現するDistal Visceral Endoderm (DVE)が前方へと移動してAnterior Visceral Endoderm (AVE)になっているのですが、AVEからはBMPシグナルを阻害する因子が分泌されており、中胚葉誘導が阻害されるのです。

Axis Development and Early Asymmetry in Mammals Cell Volume 96, Issue 2p195-209January 22, 1999 https://www.cell.com/fulltext/S0092-8674%2800%2980560-7

1. The role of BMP4 signaling in trophoblast emergence from pluripotency Cellular and Molecular Life Sciences 25 July 2022 Volume 79, article number 447, (2022)

マウス Distal Visceral Endoderm (DVE)におけるHEX遺伝子の発現

原腸形成に至る流れの始めの段階で生じる変化の一つは、DVEでのHEX遺伝子の発現です。

1. Jeremy Davis. Life Unfolding

下の写真のB,C,D,EではHEX遺伝子の原始内胚葉 primitive endodermでの発現が示されています。B,Cの時期はまだカップ状になっていませんが、Dの時期にはカップ状の極の部分に位置しています。さらにE,F,Gとステージが進むと前側にHEX発現細胞が移動しているのがよくわかります。Gの時期には中胚葉マーカーであるT遺伝子が尾側に発現しています。

Fig.1　Whole-mount in situ hybridisation analysis showing asymmetrical Hex expression in the visceral endoderm of pregastrulation stage embryos. (A-C) 4.5 dpc blastocysts showing Oct-4 expression (A) in the inner cell mass and Hex expression (B,C) in the primitive endoderm (black arrowhead). (D,E) Hex expression (black arrowhead) in the distal tip visceral endoderm of 5.5 dpc embryos. Note that the Hex expression domain is immediately proximal to the distal tip in the slightly older embryo shown in E. (F,G) Double in situ hybridisation analysis of Hex (black arrowhead) and T (white arrowhead) at 6.0 dpc (F) and 6.5 dpc (G). Hex expression at 6.0 dpc is clearly asymmetrical within the endoderm prior to the accumulation of T transcripts to the nascent primitive streak at the posterior pole of the embryo (G). Bar, 40 μm (A-C); 50 μm (D); 60 μm (E-G).

Hex: a homeobox gene revealing peri-implantation asymmetry in the mouse embryo and an early transient marker of endothelial cell precursors　Development (1998) 125 (1): 85–94.　01 January 1998

BMP4シグナルは生殖細胞の形成にも必要だそうです。

1. 生殖細胞の起源　http://ikagaku.jp/wp-admin/post.php?post=12454&action=edit

ヒトにextraembryonic ectodermはあるか？

In humans, a structure equivalent to the mouse extraembryonic ectoderm is not thought to form.

Pluripotent Stem Cells Susana M. Chuva de Sousa Lopes, Christine L. Mummery, in Handbook of Stem Cells (Second Edition) , 2013　https://www.sciencedirect.com/topics/engineering/extraembryonic-ectoderm

In the post-implantation mouse embryo, formation of the PS and initiation of germ layer formation are driven by signaling activities emanating from the extraembryonic tissues such as the extraembryonic ectoderm, which gives rise to chorionic ectoderm, and visceral endoderm and from within the epiblast. However, in primates, there is no clear equivalent to the TE-derived extraembryonic ectoderm of the mouse, which is a major source of BMP to induce gastrulation and primitive-streak formation. In humans and nonhuman primates, the amnion (amniotic epithelium) is reputed to behave like a signaling center of BMP activity to induce the differentiation of mesoderm in the Cynomolgus embryonic disc and the human PASE (Shao et al., 2017; Yang et al., 2021; Zheng et al., 2019). https://www.cell.com/developmental-cell/pdf/S1534-5807(21)01042-X.pdf

そうなるとヒトの場合は、どこから最初のシグナルが来るの？という疑問が湧きます。

Early mouse embryonic development. As described in the text, the blastocyst at 3.5 dpc consists of two tissues: the inner cell mass and trophectoderm. At 4.5 dpc the primitive endoderm is formed and the embryo starts to implant into the uterine wall. By 5.5 dpc, the embryo is cup-shaped　https://www.researchgate.net/figure/Early-mouse-embryonic-development-As-described-in-the-text-the-blastocyst-at-35-dpc_fig1_228357767

BMP4シグナル

Front Cell Dev Biol. 2024 Apr 22;12:1386739. doi: 10.3389/fcell.2024.1386739 A comprehensive review: synergizing stem cell and embryonic development knowledge in mouse and human integrated stem cell-based embryo models https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC11074781/

上皮ー間葉転換 EMT

1. Basal delamination during mouse gastrulation primes pluripotent cells for differentiation https://pmc.ncbi.nlm.nih.gov/articles/PMC7616279/

細胞移動に必要な分子

人間が歩くときに、片足で地面をつかんで、もう一方の足を前にやり、こんどはその足で地面をつかんで、もう一方の足を前に出すということを繰り返します。細胞も全く同じで、足場に接着し、全体を動かし、足場から離れて、また次の足場にくっつきます。分子としてｈ、Cdc42, Rac, Rhoなどが関与するよです（下の動画参照）。

Cell locomotion | cell motility | cell migration | Rho-Rac-Cdc42 signaling in cell locomotion Animated biology With arpan チャンネル登録者数 27.8万人

Cdc42は細胞の極性を維持し、細胞が動く方向を制御しているそうです。chemoatractantを与えて細胞を引き寄せる実験において、Cdc42が働かないようにした細胞は、細胞の移動はできるが、方向性を失うのだそう。

Racはアクチンの重合を促進して細胞の足を前に突き出して、インテグリンと細胞外基質との接着も行う。

Developmental Biology Volume 265, Issue 1, 1 January 2004, Pages 23-32 Developmental Biology Review Cell migration: Rho GTPases lead the way https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S001216060300544X

下の図が、細胞が移動するときの各ステップを分解して説明しているので分かりやすいです。

　S

Signaling networks of Rho GTPases in cell motility May 2013Cellular Signalling 25(10) DOI: 10.1016/j.cellsig.2013.04.009 SourcePubMed LicenseCC BY-NC-ND 3.0 Samer J HannaSamer J HannaMirvat El-Sibai　https://www.researchgate.net/publication/236739227_Signaling_networks_of_Rho_GTPases_in_cell_motility

細胞移動におけるCdc42, Rac, Rhoの役割

Cdcc42, Rac, RhoはどれもRho低分子GTP結合タンパク質のファミリーメンバーです。いずれも細胞骨格の制御に関与します。

Distinct predictive performance of Rac1 and Cdc42 in cell migration ScienceVio チャンネル登録者数 8620人　Published: 04 December 2015 Distinct predictive performance of Rac1 and Cdc42 in cell migration Masataka Yamao, Honda Naoki, Katsuyuki Kunida, Kazuhiro Aoki, Michiyuki Matsuda & Shin Ishii Scientific Reports volume 5, Article number: 17527 (2015)

ニワトリ胚の中胚葉細胞の移動経路

1. Cell movement patterns during gastrulation in the chick are controlled by positive and negative chemotaxis mediated by FGF4 and FGF8　Dev Cell . 2002 Sep;3(3):425-37. doi: 10.1016/s1534-5807(02)00256-3.　https://www.cell.com/developmental-cell/fulltext/S1534-5807(02)00256-3　蛍光標識した 原始結節(node)の移植片の細胞の移動経路を経時的に観察
2. Fates and migratory routes of primitive streak cells in the chick embryo Delphine Psychoyos, Claudio D. Stern Author and article information Development (1996) 122 (5): 1523–1534.　01 May 1996 　https://journals.biologists.com/dev/article/122/5/1523/39034/Fates-and-migratory-routes-of-primitive-streak

ニワトリ胚のFGFの役割

FGF signalling through RAS/MAPK and PI3K pathways regulates cell movement and gene expression in the chicken primitive streak without affecting E-cadherin expression Katharine M Hardy, Tatiana A Yatskievych, JH Konieczka, Alexander S Bobbs & Parker B Antin BMC Developmental Biology volume 11, Article number: 20 (2011)　Published: 21 March 2011 https://bmcdevbiol.biomedcentral.com/articles/10.1186/1471-213X-11-20

Gene expression pattern Expression of Fgf4 during early development of the chick embryo　Mechanisms of Development Volume 85, Issues 1–2, 1 July 1999, Pages 189-192 　https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S0925477399000933

1. FGF Signaling Regulates Mesoderm Cell Fate Specification and Morphogenetic Movement at the Primitive Streak　Developmental Cell　Volume 1, Issue 1p37-49July 2001　https://www.cell.com/developmental-cell/fulltext/S1534-5807(01)00017-X

マウス胚のFGFの役割

1. Targeted disruption of Fgf8 causes failure of cell migration in the gastrulating mouse embryo　Genes & Dev. 1999. 13: 1834-1846　https://genesdev.cshlp.org/content/13/14/1834/F1.expansion.html

AK Hadjantonakis: Cell lineage specification & tissue morphogenesis in the early mouse embryo. Genetics Society of America チャンネル登録者数 2040人

CerberusやDickkopfによるWntシグナリングの阻害

Heads or tails: Wnts and anterior–posterior patterning Terry P Yamaguchi Current Biology Volume 11, Issue 17pR713-R724　September 04, 2001　https://www.cell.com/current-biology/fulltext/S0960-9822%2801%2900417-1

nordal

The ability of the Nodal pathway to induce both mesoderm specification and axis extension in explants is consistent with its role in vivo, where Nodal is necessary for both (37–40). For example, mouse embryos mutant for Nodal signaling components fail to gastrulate entirely (41). Zebrafish embryos lacking all Nodal function – through loss of the coreceptor Tdgf1/Cripto (MZoep-/-) (40), ligands (sqt-/-cyc-/-) (38), or downstream effector Smad2 (MZsmad2-/-) (42) – similarly lack all endoderm and most mesoderm and undergo abnormal gastrulation movements resulting in a severely shortened AP axis.

Temporal dynamics of BMP/Nodal ratio drive tissue-specific gastrulation morphogenesis  https://www.biorxiv.org/content/10.1101/2024.02.06.579243v1.full

Eomes, Criptなどのシグナル分子

From fertilization to gastrulation: axis formation in the mouse embryo.　Curr Opin Genet Dev . 2001 Aug;11(4):384-92. DOI:10.1016/S0959-437X(00)00208-2Corpus ID: 17925624

 

a–l, Whole-mount in situ hybridization analysis. a, Uniform symmetric staining in the epiblast at 5.5 d.p.c.; b, a cross section shows lack of expression in the visceral endoderm. c, d, Proximal–distal gradient of expression in the epiblast. e, Sagittal section of d. f, g, Expression shifts caudally before the onset of gastrulation at 6.5 d.p.c. h, Cross-section of g shows widespread expression in the epiblast and no expression in the visceral endoderm. i, Mid-streak stage; j, cross-section shows intense staining in the newly formed embryonic mesoderm. k, l, Expression persists in the primitive streak and head process at the neural plate stage. m–r, β-Galactosidase staining of Cripto heterozygotes. m, n, Uniform staining in the epiblast before gastrulation. o, Sagittal section shows proximal–distal graded staining just before gastrulation. p, Early-streak stage embryo, and q, cross-section. r, Early neural-plate-stage embryo: note more intense staining at distal end of the primitive streak. In all panels, anterior faces to the left when anterior–posterior orientation can be identified; staging before primitive streak formation is approximate. Scale bars, 0.05 mm. A, anterior; D, distal; ep, epiblast; hp, head process; m, mesoderm; P, posterior; Pr, proximal; ps, primitive streak (bar denotes extent of streak); ve, visceral extra-embryonic endoderm.

Cripto is required for correct orientation of the anterior–posterior axis in the mouse embryo　Nature volume 395, pages702–707 (1998)　Published: 15 October 1998 　https://www.nature.com/articles/27215

1. The Dynamics of Morphogenesis in the Early Mouse Embryo.　Cold Spring Harbor Perspectives in Biology, 26 Jun 2014, 7(11):a015867 https://doi.org/10.1101/cshperspect.a015867 PMID: 24968703 PMCID: PMC4277506　
2. Blastocyst lineage formation, early embryonic asymmetries and axis patterning in the mouse J. Rossant, P. Tam Published in Development 1 March 2009 Biology　DOI:10.1242/dev.017178Corpus ID: 207151163

Vg1

1. Molecular mechanisms controlling the biogenesis of the TGF-β signal Vg1 PNAS October 16, 2023 120 (43) e2307203120 https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2307203120 The TGF-beta signals Nodal and Vg1 (Dvr1/Gdf3) play crucial roles in vertebrate development (1, 2), including the induction of mesendoderm and the generation of left-right asymmetry (3–17). For example, secreted Vg1-Nodal heterodimers induce a gradient of signaling that patterns the embryonic mesendoderm in zebrafish (10). Vg1-Nodal heterodimers exert their effects as ligands for a receptor complex that comprises Activin serine-threonine kinase receptors and an essential coreceptor called Oep (Tdgf1/CRIPTO) (18–20). Activated ligand-receptor complexes catalyze phosphorylation of Smad2 (pSmad2), which accumulates in the nucleus to induce the expression of mesendodermal genes (21).

中胚葉マーカー分子

Brachyury (TBXT (human), also T/Bra (mouse))

1. TBXT dose sensitivity and the decoupling of nascent mesoderm specification from EMT progression in 2D human gastruloids　bioRxiv [Preprint]. 2023 Nov 9:2023.11.06.565933. [Version 2] doi: 10.1101/2023.11.06.565933
2. The T gene is necessary for normal mesodermal morphogenetic cell movements during gastrulation　Development (1995) 121 (3): 877–886.　the phenotype of homozygous mutant mouse embryos does not obviously correlate with an essential function for T during the early stages of gastrulation, since development rostral to the forelimb bud appears grossly normal. Only in more caudal trunk regions and in later embryos is the notochord missing and other mesodermal derivatives deficient or defective (Herrmann, 1992; Beddington et al., 1992; Rashbass et al., 1994).　https://journals.biologists.com/dev/article/121/3/877/38504/The-T-gene-is-necessary-for-normal-mesodermal　機能的に重要そうなのにノックアウトマウスの表現型は非常にささやか。
3. A cell autonomous function of Brachyury in T/T embryonic stem cell chimaeras Nature volume 353, pages348–351 (1991)  https://www.nature.com/articles/353348a0
4. Expression pattern of the mouse T gene and its role in mesoderm formation. Nature, 343(6259), 657–659. 10.1038/343657a0　Wilkinson D. G., Bhatt S., & Herrmann B. G. (1990). https://www.nature.com/articles/343657a0　有料
5. Effects of the brachyury (T) mutation on morphogenetic movement in the mouse embryo　Dev Biol . 1981 Oct 30;87(2):242-8. doi: 10.1016/0012-1606(81)90147-0. 有料